Поиск

Полнотекстовый поиск:
Где искать:
везде
только в названии
только в тексте
Выводить:
описание
слова в тексте
только заголовок

Рекомендуем ознакомиться

'Закон'
Наследственность и гомеостаз организма. Норма реакции организма и ее генетическая детерминированность. Здоровье и болезнь суть отражения генетическог...полностью>>
'Доклад'
Областная государственная общеобразовательная школа-интернат «Школа-интернат среднего (полного) общего образования №4» города Курска основана в 1957 ...полностью>>
'Рабочая программа'
Данная программа составлена в соответствии с Обязательным минимумом содержания образования школьников в области физической культуры и Минимальными тр...полностью>>
'Рабочая программа курса'
Основу программы составляет обязательный минимум знаний по органической химии для полной средней школы. Однако программа максимально привязана к сель...полностью>>

Тезисы докладов (5)

Главная > Тезисы
Сохрани ссылку в одной из сетей:

ПРИ СИСТЕМНОМ ВОСПАЛИТЕЛЬНОМ СИНДРОМЕ И СЕПСИСЕ У МЫШЕЙ. ПОИСК НОВЫХ НАПРАВЛЕНИЙ ЛЕЧЕНИЯ

Е.Г. Новоселова, С.М. Лунин, М.О. Хренов, Т.В. Новоселова,

О.В. Глушкова, С.Б. Парфенюк

Институт биофизики клетки РАН, Пущино

Семейство рецепторов с общим названием “toll-like receptors” (TLR’s) является частью системы, определяющей функцию врожденного иммунитета, связанного с распознаванием патогенов микробного происхождения, в частности липоплисахаридов (ЛПС), которые использовались в настоящей работе для моделирования острого и хронического воспалений у мышей. Возможность регулирования активности этого рецептора позволила бы управлять механизмом связывания рецептора с лигандом, что, в свою очередь, было перспективным для снижения уровня интоксикации при воспалениях. Было сделано предположение о том, что TLR4 может участвовать в формировании ответа клеток не только на действие бактериальных токсинов, но и на сигналы другой природы. Основанием для такой гипотезы послужили результаты экспериментов, указывающие на защитный эффект низкоинтенсивных электромагнитных волн сантиметрового диапазона (8-18 ГГц, 1 мкВт/см2), применение которых значительно снижало как уровень цитокинового ответа на действие эндотоксина, так и экспрессию белка теплового шока Hsp70. Исследовали механизмы участия TLR4 в регуляции ответа клеток на действие неионизирующих излучений – низкоинтенсивных ЭМИ СВЧ и лазерного света. Установлено, что низкоинтенсивное электромагнитное воздействие резко повышает экспрессию TLR4 в В-лимфоцитах мышей, а лазерный свет, напротив, ингибирует экспрессию этого рецептора в клетках. Таким образом, получены прямые доказательства участия рецептора TLR4 в реализации иммуностимулирующего действия низкоинтенсивных электромагнитных волн сантиметрового диапазона. Более того, показано, что предварительное облучение мышей достоверно повышало их выживаемость при сепсисе, индуцированном пролонгированным введением ЛПС.

Кроме того, в качестве защитного анти-воспалительного агента исследовали новый антибиотик гелданамицин, известный ингибитор активности Hsp90 и тирозин киназы. Обнаружили, что гелданамицин, для которого ранее была доказана противораковая активность, в условиях острого и хронического воспалений предотвращает подъем продукции цитокинов (TNF-, IF-γ, IL-1, IL-6), NO и белков теплового шока (Hsp70 и Hsp25 – в клетках и клеточных органеллах). При этом обнаружили, что культивирование лимфоцитов в присутствии гелданамицина вызывает значительное уменьшение количества фактора транскрипции NF-κB, его фосфорилированной формы pNF-κB и белка, подавляющего его активность, IκB-α. Кроме того, присутствие гелданамицина в среде культивирования клеток вызывало заметное снижение экспрессии протеинкиназы SAPK/JNK. Все эти эффекты проявлялись на фоне практически полной блокировки рецептора TLR4. Таким образом, в реализацию анти-воспалительного эффекта гелданамицина вовлечены TLR4 и белки сигнальных каскадов NF-κB и SAPK/JNK.

В условиях хронического воспаления показано защитное действие тимусного гормона тимопентина, которое проявлялось в увеличении продукции оксида азота, интерферона-γ, белка теплового шока семейства Hsp70, а также в более быстром восстановлении количества клеток в тимусе и способности макрофагов к гиперпродукции фактора некроза опухолей-α после отмены введения ЛПС и гормона. Полученные результаты показывают, что тимопентин позволяет уменьшить супрессию иммунных клеток и восстановить активность клеток иммунной системы в условиях хронического воспаления.

СТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПЛАЦЕНТЕ И ЕЕ СОСУДИСТОМ РУСЛЕ, СОПРОВОЖДАЮЩИЕ НАРУШЕНИЯ ГЕМОДИНАМИКИ

ПРИ СИНДРОМЕ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ

В.А.Отеллин*, Л.И. Хожай*, Н.Г. Павлова**, А.В.Гагарина**,

Т.Т. Шишко*

*Институт физиологии им. И.П.Павлова РАН, Санкт-Петербург

**НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт-Петербург

Синдром плацентарной недостаточности занимает важное место при патологии беременности, являясь одной из ключевых проблем акушерства, приводящей к гипотрофии плода и заболеваниям в пери- и постнатальном периоде. В связи с актуальностью проблемы особую значимость приобретают исследования направленные на ранее выявление плацентарной недостаточности и разработки методов ее коррекции. Цель очередного этапа исследования состояла в выявлении структурных изменений в плаценте и элементах ее сосудистого русла у человека при нарушении гемодинамики при синдроме плацентарной недостаточности.

При ультразвуковом исследовании оценивали показатели объемного внутриплацентарного кровотока на протяжении III триместра у женщин с физиологически текущей беременностью и при выявленной плацентарной недостаточности. Ультразвуковое исследование в режиме энергетической допплерометрии на ультразвуковом диагностическом приборе Voluson 730 expert показало, что индекс васкуляризации (IV) характеризуется значительной индивидуальной и региональной вариабельностью как при физиологическом течении беременности, так и при выявленной плацентарной недостаточности. Средние значения IV были схожими и составляли 6,33±0,73 и 6,33±0,62 (р>0,05) соответственно. Потоковый индекс (FI) был менее вариабильным. Ретроспективное сопоставление его значений, определенных при объемной трехмерной ультразвуковой реконструкции плацентарного сосудистого русла в III триместре у пациенток, как с физиологическим течением беременности, так и при плацентарной недостаточности, показало достоверное снижение FI у последних. Средние значения составили 36,42±0,92 и 32,79±0,53 при этом t=3,42 (р<0,01), что может отражать снижение интенсивности плацентарной перфузии при гипотрофии плода. Гистологическое и иммуноцитохимическое [α-актин гладкомышечных клеток, мышечный актин, коллаген IV типа, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и эндотелиальный мембранный белок (Cd31)] исследование выявило ряд характерных изменений, касающихся как структуры ворсин, так и элементов сосудистого русла плацент при выраженной плацентарной недостаточности. При этом показано, что имеет место снижение количества терминальных ворсин. В промежуточных и терминальных ворсинах обнаружено сужение просветов сосудов разного калибра. Периваскулярная оболочка артерий и артериол в промежуточных и терминальных ворсинах представлена увеличенным количеством гладкомышечных клеток и более плотным расположением их концентрических слоев вокруг сосудов. К концу III триместра значительные участки этих ворсин покрывает цитотрофобласт, что свидетельствует о нарушении его трансформации в синцитиотрофобласт. Показано, что имеет место снижение синтеза коллагена IV типа, волокон которого в строме ворсин меньше и располагаются они более рыхло. В терминальных ворсинах плацент при плацентарной недостаточности выявлено утолщение эндотелиальной стенки артериол и капилляров и нарушение трансформации последних в капилляры-синусоиды, количество которых значительно ниже, чем в норме, что, в свою очередь, приводит к снижению числа синцитиокапиллярных мембран, представляющих истинный плацентарный барьер, осуществляющий плацентарную диффузию. Сопоставление клинических и морфологических данных позволяет заключить о высокой диагностической значимости потокового индекса при диагностике плацентарной недостаточности.

РОЛЬ РЕЦЕПТОРНОЙ ТИРОЗИНКИНАЗЫ ИРР В РЕГУЛЯЦИИ КИСЛОТНО-ЩЕЛОЧНОГО РАВНОВЕСИЯ

А.Г. Петренко1), И.Е. Деев1), О.В. Серова1), Н.В. Попова1),

Д.И. Ржевский2), А.А. Берчатова2), А.Н. Мурашов2)

1)Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина

и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва,

2)ФИБХ РАН, Пущино

Важным свойством живого организма является поддержание кислотно-щелочного равновесия и ионного состава внутренней среды, оптимально способствующего жизнедеятельности клеток в условиях изменяющейся внешней среды. Физиологические процессы, контролирующие рН внутренних жидкостей организма, достаточно подробно описаны. В то же время механизмы регуляции данных процессов на молекулярном уровне изучены недостаточно.

Нами ранее был открыт рецептор поверхности клетки, способный исполнять роль сенсора щелочной среды. Им оказалась ранее описанная рецепторная тирозинкиназа ИРР (IRR, insulin receptor-related receptor) – "сиротский" рецептор, высокогомологичный рецептору инсулина. Поскольку ИРР специфично расположен в отдельных популяциях клеток почек, желудка и поджелудочной железы, полученные нами результаты позволяют предположить, что состояние алкалоза способно стимулировать метаболизм в ИРР-содержащих клетках и таким образом осуществлять регуляцию кислотно-щелочного равновесия.

Для проверки данной гипотезы мы проанализировали возможность активации ИРР при экспериментально индуцированном алкалозе in vivo. Для этого в рацион испытуемых крыс вводили бикарбонат натрия. При этом рН мочи достигал щелочных значений от 8 до 9, однако устойчивого алкалоза достичь не удавалось. В то же время эксперименты in vitro показали, что ИРР инактивируется практически мгновенно при нейтрализации среды. Поэтому нами была проведена прямая перфузия почек слабощелочным раствором бикарбоната натрия через артерию. Спустя 10 мин почки извлекали, гомогенизировали и экстрагировали неионным детергентом. Экстракт преципитировали анти-ИРР антителами и анализировали Вестерн-блоттингом с анти-фосфотирозин антителами.

В результате данного эксперимента было доказано, что ИРР может активироваться слабощелочной средой в условиях in vivo.

Нами изучено распределение ИРР в клетках поджелудочной железы при помощи иммунофлуоресцентной спектроскопии. ИРР был обнаружен во всех типах островковых клеток. Наиболее примечательно, что ИРР присутствует в клетках, непосредственно контактирующих с протоками железы и, таким образом, может непосредственно контактировать со щелочным соком поджелудочной железы.

Для анализа структурных особенностей активации рецептора щелочной средой сконструированы его химеры с заменой отдельных доменов внеклеточной части на их аналоги из инсулинового рецептора. Установлено, что чувствительность ИРР к щелочи определяется прежде всего доменами L1F. В то же время другие домены внеклеточной части рецептора усиливают его ответ на стимуляцию щелочью.

Для дальнейшего анализа физиологической роли ИРР нами получена линия гомозиготных нокаутных мышей.

НОВЫЕ АСПЕКТЫ В ИЗУЧЕНИИ МОЛЕКУЛЯРНЫХ ОСНОВ САХАРНОГО ДИАБЕТА: ИДЕНТИФИКАЦИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ДЕФЕКТОВ В СИГНАЛЬНЫХ МЕХАНИЗМАХ ДЕЙСТВИЯ ГРУППЫ ПЕПТИДНЫХ ГОРМОНОВ И БИОГЕННЫХ АМИНОВ С ПРИМЕНЕНИЕМ НАНОБИОСЕНСОРОВ И БИОХИМИЧЕСКИХ ТЕСТОВ

М.Н.Перцева 1), А.О.Шпаков 1), Л.А.Кузнецова 1), С.А.Плеснёва 1), О.В.Чистякова 1), В.М.Бондарева 1), Е.А.Манова 2)

1)Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова, РАН, Санкт-Петербург, 2)Клиническая больница РАН, Санкт-Петербург

Основываясь на инновационных разработках лаборатории, включающих:

1) открытие нового класса аденилатциклазных сигнальных систем, участвующих в действии гормонов и ростовых факторов инсулинового суперсемейства;

2) концепцию молекулярных дефектов в гормональных сигнальных системах как ключевых причин эндокринных заболеваний;

3) пептидную наностратегию, состоящую в синтезе пептидов, гомологичных участкам сигнальных белков и используемых как нанобиосенсоры для идентификации дефектов в сигнальных системах, было проведено изучение молекулярных основ сахарного диабета на экспериментальных моделях (крысы).

1. При изучении диабета 2-го типа на неонатальной стрептозотоциновой модели в мозговой ткни крыс обнаружено, что через 80 и 120 сутки развития диабета наблюдается отчетливое снижение стимулирующего аденилатциклазу эффекта гормонов инсулиновой природы (инсулин, релаксин, инсулиноподобный фактор I – ИФР-I), а также эпидермального фактора роста (ЭФР) по сравнению с контрольными животными. На 180 и 210 сутки наблюдается восстановление этих эффектов в мозгу. Сходная картина выявлена и в скелетных мышцах крыс с диабетом 2-го типа на тех же сроках.

2. Исследовано функциональное состояние NO-синтазной сигнальной системы (NOS), сопряженной с гуанилатциклазным сигнальным механизмом в норме и при диабете 2-го типа. Установлено, что в скелетных мышцах крыс NOS представлена двумя мембранными изоформами – эндотелиальной (eNOS) и нейрональной (nNOS), которые стимулируются инсулином, ИФР-I и релаксином. При диабете 2-го типа 80 и 180 дней найдено, что активность обеих изоформ NOS и стимулирующее действие гормонов инсулиновой группы снижается. Таким образом, обнаружены функциональные нарушения при диабете не только в аденилатциклазных, но и NO-гуанилатциклазных сигнальных системах.

3. При выявлении (с помощью биохимических тестов и нанобиосенсоров) функциональных изменений и молекулярных дефектов, возникающих при диабете 1- и 2-го типов в инсулинкомпетентных сигнальных системах обнаружено, что на уровне рецептора инсулина происходит увеличение числа низко- и высокоаффинных связывающих мест и снижение экспрессии мРНК субстрата инсулинового рецептора (ИРС2). На пострецептоных стадиях передачи сигнала наблюдается ослабление функционального сопряжения на уровне G белков и аденилатциклазы.

Совокупность полученных впервые экспериментальных данных подтверждают сделанный авторами вывод о полигормональном генезе сахарного диабета и о системном ответе сигнальной сети гормонокомпетентной клетки на эту патологию.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ И АНАЛИЗ ГЕНЕТИЧЕСКИХ И СРЕДОВЫХ ФАКТОРОВ В ЭТИОЛОГИИ И ПАТОГЕНЕЗЕ СОЦИАЛЬНО ЗНАЧИМЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Э.С. Пирузян1), Р.М. Абдеев 2), С.А. Брускин 1), В.В. Соболев 1),

И.А. Абдеева 1), А.Г. Соболева 1), И.М. Корсунская 3), О.Ю. Рахимова 4),

Х.А. Курданов 5)

1)Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН, г. Москва

2) Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН, г. Москва

3)Городская клиническая больница № 15, г. Москва

4)Городская клиническая больница № 24, г. Москва

5)Центр медико-экологических исследований Филиала ГНУ РФ ИМБП РАН, г. Нальчик

Актуальной задачей современной медицины является изучение генетических и средовых факторов запуска патогенеза многофакторных заболеваний, к которым относят большинство сложных патологий, включая кардиоваскулярные заболевания, псориаз и болезнь Крона, выбранные нами в качестве исследуемых патологий.

Псориаз – заболевание кожи, кардиоваскулярные болезни и болезнь Крона – заболевание эпителия кишечника, являются сложными генетически обусловленными патологиями, в проявлении которых задействованы большие группы (сети) взаимодействующих генов/белков. С помощью биоинформационных исследований модифицирована и дополнена ранее созданная нами генная сеть псориаза, найден ряд узловых транскрипционных факторов, таких как АР-1, NFkB, SP-1, c-Myc, STAT3 и др. Построена генная сеть, являющаяся общей частью для псориаза и болезни Крона, а также генная сеть кардиоваскулярных болезней. Идентифицированы общие узловые гены-индукторы и проводники патологического сигнала для болезни Крона и псориаза. Собран биологический материал у больных псориазом, болезнью Крона и больных разными видами кардиоваскулярных болезней (кровь, биопсии) в количестве 120 (сто двадцать) единиц от 120 различных больных. Собран информационный материал у больных псориазом, болезнью Крона и кардиоваскулярными болезнями (заполнены Индивидуальные Информационные Карты) в количестве 250 (двести пятьдесят) единиц с целью разделения пациентов на группы и индивидуализации лечения. Результаты этой части работы позволили создать массивы данных об индивидуумах для проведения их анализа с целью выявления генетических и средовых факторов риска развития заболеваний.

С помощью методов Real-Time PCR проведены эксперименты по количественному определению экспрессии 11 отобранных в соответствии с разработанной моделью генов-кандидатов и ассоциированных генов при псориазе, болезни Крона и кардиоваскулярных болезнях.

На основании данных по молекулярно-генетическому анализу проведены поиски генетических маркеров, наличие которых в организме обусловливает восприимчивость организма человека к определенному заболеванию. В рамках данного направления исследований осуществлена систематизация и обобщение результатов, проведена отработка новых схем лечения больных псориазом. Полученные результаты могут быть использованы повсеместно во всех клиниках, специализирующихся на диагностике и лечении кожных и кишечных болезней.

ВЫЯСНЕНИЕ РОЛИ НОВЫХ АМИЛОИДНЫХ САРКОМЕРНЫХ ЦИТОСКЕЛЕТНЫХ БЕЛКОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ АМИЛОИДОЗОВ

С ЦЕЛЬЮ РАЗРАБОТКИ МЕТОДОВ ИХ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ И КОРРЕКЦИИ

З.А. Подлубная1,2), И.Я. Подольский1), Л.Г. Марсагишвили1),

М.Д. Шпагина1), И.М.Вихлянцев1), А.А. Федюшин2), Т.В. Гордиенко2),

Р.У. Островская3), А.Б. Гехт4)

1)Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино;

2)Больница Пущинского научного центра РАН, Пущино;

3)Институт фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, Москва;

4)Российский Государственный медицинский университет, Москва

Амилоидные отложения, образующиеся в органах и тканях в результате наследственного или приобретенного нарушения сворачивания белков, играют центральную роль в патогенезе болезней, от которых страдают миллионы пациентов (болезнь Альцгеймера, Паркинсона, синдром Дауна, диабет второго типа, кардиопатический амилоидоз, системные амилоидозы, прионные болезни и др.). Эти болезни – главная причина смерти после сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний. Молекулярные механизмы амилоидозов до конца неясны. Их выяснение необходимо для их предупреждения, ранней диагностики и назначения своевременного, эффективного лечения. Для этого необходимо знание амилоидогенеза: выявление общих свойств амилоидов, образуемых разными белками, знание факторов, регулирующих их образование и разрушение, их эффектов на жизнедеятельность клеток и т. д. В рамках программы Президиума РАН «Фундаментальные науки – медицине» мы открыли новые амилоидные белки, саркомерные мышечные белки семейства тайтина (тайтин, С-, Х-, и Н-белки). Обнаружены сходные свойства амилоидных фибрилл этих белков и фибрилл Аβ-пептидов при болезни Альцгеймера (БА). С помощью ЭМ было показано антиамилоидное действие тетрациклина, фуллерена С60, поликарбоксильного производного фуллерена С60 (ППФ) на амилоидные фибриллы Х-, С- и Н-белков и Абета-пептидов 25-35 и 1-42. Важно, что указанные препараты и предотвращали образование амилоидов, как и ноопепт, и дипепт ГЗР-123. Это важно, поскольку сегодняшняя превентивная стратегия основана на идее предотвратить переход мягких когнитивных нарушений и начальных форм АД в развитые формы этой болезни. Антиамилоидное действие препаратов было проверено и на клеточной культуре полиморфноядерных лейкоцитов по увеличению в их присутствии выживаемости клеток, гибнущих под действием токсичных амилоидов. Этот метод позволяет проверить на токсичность не только амилоиды в разные стадии их формирования, но и сами препараты и фрагменты распада амилоидов, что также отвечает требования практики. Такой подход в комплексе с визуальной оценкой позволяет осуществлять подбор наиболее ценных лекарственных средств для борьбы с разными амилоидами и амилоидозами, что является целью и дальнейших наших исследований. Несомненно, что большое значение в терапии имеет также и преклиническая диагностика разных амилоидозов. Для этого эффективным подходом может быть метод твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА) регистрация с его помощью в крови пациента аутоантител к амилоидам или амилоидных белков с помощью антител и снижения их количества в крови как указание на эффективность используемого терапевтического подхода. С помощью ТИФА нами были зарегистрированы аутоантитела к Н-белку в сыворотке крови у пациентов с ревматоидным артритом и с подозрением на амилоидоз (биопсия прямой кишки) и аутоантитела к Аβ-пептиду (25-35) в крови у пациентов с БА. Использование этого метода входит в план наших и дальнейших исследований. Он открывает пути развития ранней щадящей диагностики амилоидозов. На наш взгляд, это безопасный метод по сравнению с пункционной биопсией спинномозговой жидкости. Такой диагностический тест может быть разработан для разных амилоидозов с использованием соответствующего белка-предшественника.

РАЗВИТИЕ НОВОГО ПОДХОДА К ОСНОВАМ ЭТИОПАТОГЕНЕЗА СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ (В АСПЕКТЕ ИЗМЕНЕНИЙ КОЛЛАГЕНА СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ)

В.Г. Туманян1), Е.С. Котовская2), И.В. Филатов1), С.П. Домогацкий3),

В.П. Барграсер3), В.А. Намиот4), Ю.В. Мильчевский1), Н.Г. Есипова1)

1)ИМБ РАН, 2)ФГУ ГБМСЭ по г. Москве, 3)ИЭК РКНПК МЗРФ, 4)НИИЯФ МГУ

Привлечение методов фундаментальных исследований для решения задач, выдвинутых клинической практикой, позволяет ожидать разрешения в 21 веке до сих пор не решенных до конца проблем этио-патогенеза сердечно-сосудистых заболеваний – основной причины смертности в индустриально развитых странах.

Врожденные заболевания соединительной ткани часто отягощены сопутствующей патологией сердечно-сосудистой системы – в качестве референтной группы была выбрана социально-значимая категория детей-инвалидов, с крайней степенью выраженности аномалий сердечно-сосудистой системы с сопутствующей отягощенностью синдромами Элерса-Данлоса и Марфана. Эта группа прошла медико-социальную экспертизу в г. Москве и стала объектом иммунологического исследования. Был проведен количественный иммуноферментный анализ уровня аутоантител к коллагену I-VI типов в образцах крови 28 человек (трех поколений шести семей). По сравнению с контрольными группами здоровых людей (нулевая реакция) и отобранными больными СКВ (позитивная неспецифическая реакция), у исследованной выборки пациентов обнаружена выраженная иммунная реакция на коллаген базальных мембран IV типа. Исключение составляет только одна семья с нулевой реакцией у трех поколений. Тем самым в прикладном плане был сделан шаг к созданию «коллагенового» маркера ряда патологий сердечно-сосудистой системы. В фундаментальном плане выявлена важная роль коллагена IV типа, являющегося основным структурным компонентом базальной мембраны сосудов. Было показано, что фундаментальные исследования с помощью специального метода компьютерного анализа – комбинации молекулярной механики и статистического анализа, позволяют выявлять структурные и энергетические последствия замены тех или иных аминокислотных остатков в полипептидной цепи коллагенов. На основе проведенных расчетов получено объяснение того, как наблюдаемое для белков-мутантов изменение структуры и компонент энергии в местах аминокислотных замен связано с ассоциированными с болезнями изменениями в соединительной ткани. Патологический эффект интерпретируется в терминах изменения локальной стабильности макромолекул коллагена вследствие аминокислотной замены, в результате которой нарушается соответствие температуры плавления макромолекулы коллагена физиологической температуре организма.

Для коллагена IV проведены априорные расчеты трехмерной структуры по последовательности аминокислот (с использованием оригинальных программ и программ ICM и Tinker). Сложность представляют сегменты макромолекулы с нарушением регулярного чередования глицина, с включением аланина вместо глицина. Эти сегменты были рассчитаны с учетом данных ЯМР по межатомным расстояниям. Проведены оценки локальной температуры плавления и вариации механических свойств коллагена вдоль молекулы, разметка Т- и В-эпитопов и оценка гидратации.

Обсуждается интерпретация патологического эффекта мутаций (с учетом клинических проявлений) в терминах изменения локальных и глобальных свойств макромолекул коллагенов, приводящих к нарушениям процесса фибриллогенеза. Проводится секвенирование коллагена IV типа пациентов референтной группы.

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ МЕДНОЙ ФЕРРОКСИДАЗЫ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА С БЕЛКАМИ НЕЙТРОФИЛОВ

В.Р.Самыгина 1), А.В.Соколов 2), Е.В.Филиппова 1), Е.Т.Захарова 2), В.Б.Васильев 2), Г.Бартуник 3)

1) Институт кристаллографии РАН, Москва

2) ГУ НИИ экспериментальной медицины, Санкт-Петербург

3) ASMB-MPG, DESY, Hamburg, Germany

Большинство биохимических процессов в организме регулируются белок-белковыми взаимодействиями. Церулоплазмин (ЦП) – медьсодержащая ферроксидаза плазмы крови человека образует бинарные комплексы с несколькими белками нейтрофилов: миелопероксидазой, лактоферрином, катепсином G, нейтрофильной эластазой, азурацидином, протеиназой 3. Взаимодействие с миелопероксидазой было установлено ранее [1], взаимодействие с остальными 4 белками установлено нами [2]. Все выявленные белки являются аутоантигенами, провоцирующими развитие системных васкулитов. Вероятно, взаимодействие этих белков с церулоплазмином является частью механизма участвующего в патогенезе этих заболеваний.

Мы начали исследование этих взаимодействий с изучения бинарных комплексов церулоплазмин-миелопероксидаза и церулоплазмин-лактоферрин. Гем-содержащий белок нейтрофилов миелопероксидаза (МПО) катализирует образование гипохлорида, высвобождающегося в плазму крови во время иммунного ответа. Гипохлорид играет важную роль в уничтожении микробов иммунной системой, но является мощным оксидантом и его неконтролируемое внеклеточное высвобождение может приводить, в частности, к повреждению стенок артерий и соответственно, атеросклерозу. Церулоплазмин образует комплекс с миелопероксидазой (МПО), попавшeй в кровяное русло и ингибирует ее активность. Воздействие на образование и распад комплекса и/или на его структуру – эффективный инструмент оптимизации работы МПО – этого ключевого белка острой фазы воспаления, усилив его полезную антимикробную функцию и ограничив побочный повреждающий эффект. Лактоферрин – железосодержащий гликопротеин семейства трансферриновых, подавляет рост микроорганизмов.

Мы определили кинетические параметры ингибирования ЦП ферментативной активности МПО, характер диссоциации комплекса. На основании полученных результатов сделан вывод, что ЦП выступает как конкурентный ингибитор, препятствуя связыванию ароматических субстратов с активным центром МПО. Нами изучено влияние лактоферрина на ферроксидазную активность церулоплазмина.

Структуры бинарных комплексов ЦП-МПО и ЦП-ЛФ изучались методами рентгеноструктурного анализа и методом малоуглового рассеяния. Полученные в результате структуры низкого разрешения позволили определить зоны взаимодействия белков. Полученные данные хорошо согласуются с данными биохимических исследований. Нами также закристаллизован комплекс церулоплазмина с пептидом азуроцидина, содержащим участок полипептидной цепи азуроцидина, который по предварительным данным участвует во взаимодействии с церулоплазмином.

[1] Segelmark M., Persson B., Hellmark T. et al. (1997). Clin. Experim. Immunol., 108, 167-174.

[2] А.В. Соколов, М.О. Пулина, К.В. Агеева, О.Л. Рунова,

Е.Т. Захарова, В.Б. Васильев (2007). Биохимия, 72, 1072-1077.



Скачать документ

Похожие документы:

  1. Тезисы докладов (19)

    Тезисы
    Amirov, R.R. The specific recognition of substrates using sulfonato methacyclophanes modified with Gd(III) ions [Текст] / R.R.Amirov, A.B.Ziyatdinova, Z.
  2. Тезисы доклада (8)

    Тезисы
    Имперский период российской истории не может считаться изученным без осмысления феномена общественных организаций – добровольных, самоуправляющихся и надлежащим образом оформленных объединений, создававшихся на постоянной основе для
  3. Тезисы докладов (9)

    Тезисы
    Обычно приводными турбинами (ТПН) комплектуются питательные насосы конденсационных блоков мощностью 300МВт и выше, а также теплофикационный блок с турбиной Т-250.
  4. Тезисы доклада (7)

    Тезисы
    об основных итогах работы в 2010 году и первоочередных задачах по дальнейшей модернизации управления государственным имуществом и земельными ресурсами в Нижегородской области
  5. Тезисы доклада (11)

    Тезисы
    Контрольная деятельность Управления в 2007 году осуществлялась в соответствии с Планом проверок и была направлена на предупреждение чрезвычайных экологических ситуаций.
  6. Тезисы докладов (8)

    Тезисы
    Chronic treatment with aldosterone has no impact on hormones of the hypothalamic-pituitary-adrencortical axis or vasopressin levels but decreases plasma renin activity

Другие похожие документы..