Поиск

Полнотекстовый поиск:
Где искать:
везде
только в названии
только в тексте
Выводить:
описание
слова в тексте
только заголовок

Рекомендуем ознакомиться

'Документ'
В статті розкривається значення достатності капіталу банківських установ для функціонування банківської системи країни в цілому, особливо в умовах пр...полностью>>
'Документ'
Защита состоится «18 » мая 2010 г. в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д.002.009.03 Института экономики РАН по адресу: 117218, Москва, На...полностью>>
'Лекция'
(Александр Сергеевич Пушкин и Петр Яковлевич Чаадаев, Александр Иванович Герцен и Михаил Александрович Бакунин, Алексей Степанович Хомяков и Гумилевс...полностью>>
'Конкурс'
В Рамках "Реализация приоритетного национального проекта "Образование" в городе Нефтеюганске на 2008–2010 годы», учреждение дополнител...полностью>>

Эффективность иммуномодулятора беталейкин в лечении урогенитального трихомониаза 14. 00. 11 Кожные и венерические болезни

Главная > Автореферат
Сохрани ссылку в одной из сетей:

УДК 616.97+615.37-08:576.8.077.3 На правах рукописи

АХМАДИЕВ ЕРЛАН ЕРЛИКОВИЧ

Эффективность иммуномодулятора беталейкин

в лечении урогенитального трихомониаза

14.00.11 – Кожные и венерические болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Республика Казахстан

Алматы, 2008

Работа выполнена в Научно-исследовательском кожно-венерологическом институте

Научные руководители: доктор медицинских наук,

профессор Шакиров М.Т.

доктор медицинских наук,

профессор Кузьмин Ю.А.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Есенгараева З.Б.

кандидат медицинских наук,

доцент Бейсебаева У.Т.

Ведущая организация Семипалатинская государственная

медицинская академия

Защита состоится 09 января 2009 года в 15.00 часов на заседании Диссертационного Совета Д 09.09.01 при Научно-исследовательском кожно-венерологическом институте Министерства здравоохранения Республики Казахстан по адресу: 050002, г. Алматы, проспект Райымбека, 60

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-исследовательского кожно-венерологического института Министерства здравоохранения Республики Казахстан

Автореферат разослан 09 декабря 2008 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Л.А. Пшеничная

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Заболеваемость инфекциями, передающимися половым путем (ИППП), продолжает увеличиваться во всем мире. По данным ВОЗ ежегодно в мире регистрируется более 250 млн. случаев ИППП. Причем на первом месте стоит заболеваемость трихомониазом – 120 млн. случаев. В Казахстане её уровень на 2005 год составил 222,1 на 100 тыс. населения (Г.К. Аскарова, А.И. Баев, 2007).

Лечение мочеполового трихомониаза является одной из серьезных задач, что обусловлено высоким уровнем заболеваемости этой инфекцией, отсутствием гарантированного этиологического излечения трихомониаза и значительным удельным весом посттрихомонадных осложнений (В.М. Копылов и соавт., 2001).

Препаратом выбора для лечения урогенитального трихомониаза является метронидазол, синтезированный в 1959 году. Однако в последние годы появляется все больше сообщений о недостаточной эффективности препаратов группы нитроимидазолов для лечения трихомонадной инфекции.

По мнению Е.А. Межеветиновой и О.И. Михайловой (1998) лечение хронического процесса должно быть комплексным и включать в себя неспецифические методы, направленные на повышение защитных сил организма больного. С этой целью при хронических и торпидных формах трихомониаза рекомендуют проводить неспецифическую иммунотерапию, витаминотерапию, протеолитические ферменты.

В этой связи наше внимание привлек иммунный препарат нового поколения – «беталейкин». Препарат является полным аналогом ИЛ-1β – медиатора, синтезируемого клетками организма (А.С. Симбирцев, 1998). При ответе на внедрение патогенов продукция ИЛ-1 начинается в зоне первого контакта клеток-продуцентов с микроорганизмами. Первые проявления биологического действия ИЛ-1 приводят к активации местных защитных реакций. ИЛ-1 участвует в регуляции функций эндотелия, индуцируя экспрессию на его поверхности молекул адгезии, обеспечивающих прикрепление нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов, стимулирует выход нейтрофилов в очаг воспаления, усиливает адгезию, хемотаксис, фагоцитоз и продукцию свободных форм кислорода (D. Cavender et al., 1986).

Важнейшим событием в начале иммунного ответа является определение пути, по которому пойдет развитие Т-хелперов организма. Или по ТH2 типу – клеточный иммунный ответ, или по ТH3 типу – гуморальный ответ. Первые синтезируют цитокины ИЛ-2, ИЛ-3, ИФН-γ, ФНО, способствующие реализации клеточного иммунного ответа. Вторые – ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-10, влияющие на гуморальный иммунитет. Считается, что ТH2 цитокины отвечают за защиту от внутриклеточных паразитов. Известно, например, что при хламидиозе ТH2 тип развития иммунитета способствует элиминации возбудителя, а при ТH3 типе отмечается персистенция хламидийной инфекции (В.А. Молочков, И.И. Ильин, 2004). Применение беталейкина больными с персистирующим хламидиозом способствует переориентации иммунной системы организма на ТH2 тип развития иммунитета и быстрому выздоровлению. Для эффективного иммунного ответа организма на внеклеточные паразиты, какими являются трихомонады, требуется комбинация цитокинов ТH2 и ТH3 (Г.К. Спирина и соавт., 2002). Киллинг простейших осуществляется макрофагами и нейтрофилами. Сначала макрофаги и нейтрофилы фиксируются на поверхности паразитов с помощью рецепторов и специфических антител, а затем выделяют вещества (оксид азота, цитокины, супероксидные кислородные радикалы, пероксид водорода), уничтожающие паразита (А. Ройт, 2000). Взаимодействие ТH2 и ТH3 типов иммунитета при трихомониазе нарушается. Беталейкин может быть тем препаратом, который может нормализовать и активизировать противопаразитарный иммунитет.

Высокая эффективность беталейкина в клинике отмечалась при лечении хламидиоза, вирусных гепатитов, вирусного герпеса, абсцессов легких, хронических тонзиллитов и других заболеваний. При лечении трихомониаза беталейкин не использовался.

Цель работы: Разработать комплексное лечение урогенитального трихомониаза с беталейкином и на основании клинико-лабораторных методов исследований оценить эффективность предложенной терапии.

Задачи исследования:

  1. Разработать комплексное лечение больных урогенитальным трихомониазом с беталейкином.

  2. Изучить клиническую эффективность беталейкина в комплексном лечении больных урогенитальным трихомониазом и сравнить с известным методом.

  3. Разработать способ выявления цитокинов в лимфоцитах, способ выявления специфических иммунных комплексов, способ выявления антигенсвязывающих лимфоцитов (АСЛ) с помощью ИФА для оценки активности иммунитета.

  4. Оценить эффективность применения беталейкина в комплексном лечении больных урогенитальным трихомониазом по лабораторным показателям.

Научная новизна:

  • Разработан эффективный комплексный метод лечения урогенитального трихомониаза с включением беталейкина.

  • Разработан способ выявления АСЛ в ИФА, значительно более чувствительный в диагностике урогенитального трихомониаза, чем ИФА. Показано, что рецепторы АСЛ относятся к IgA.

  • Разработаны способ определения цитокинов в лизате лимфоцитов и способ выявления специфичности циркулирующих иммунных комплексов с помощью ИФА, методы, позволяющие более детально исследовать некоторые звенья иммунитета.

  • Впервые апробировано применение беталейкина в комплексном лечении урогенитального трихомониаза, что существенно повысило эффективность терапии больных.

  • Подтвержден более выраженный активный иммунный ответ в группе больных, пролеченных беталейкином на основании результатов лабораторных тестов по количественному изменению основных про- и противовоспалительных цитокинов (ИФН-γ, ИЛ-4) в крови и лимфоцитах, активности специфических антител в свободном виде и в составе ЦИК, уровню АСЛ, общему иммунному статусу.

  • Доказано преимущество применения в комплексном лечении урогенитального трихомониаза беталейкина в сравнении с циклофероном.

Практическая значимость:

  • Разработан и внедрен в практическую медицину метод комплексной терапии урогенитального трихомониаза в сочетании с иммуномодулятором беталейкин.

  • Применение беталейкина в комплексном лечении урогенитального трихомониаза существенно ускоряет процесс выздоровления больных и регрессию симптомов заболевания.

  • Разработанные способы выявления АСЛ-ИФА, цитокинов в лимфоцитах, специфичности ЦИК обеспечивают возможность объективной оценки состояния специфического иммунитета при урогенитальном трихомониазе.

Положения, выносимые на защиту:

  1. Включение по разработанной схеме иммуномодулятора беталейкин в комплексную терапию урогенитального трихомониаза существенно повышает эффективность его лечения.

  2. Разработаны способы выявления АСЛ, определения специфичности циркулирующих иммунных комплексов в ИФА, цитокинов в лимфоцитах. Разработанные методы использованы при исследовании больных урогенитальным трихомониазом.

  3. Более высокая эффективность применения беталейкина в комплексном лечении урогенитального трихомониаза по сравнению с циклофероном доказана с использованием клинических и лабораторных критериев оценки.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования, предложенные методы диагностики и терапии урогенитального трихомониаза внедрены в практическую работу отдела венерологии РГКП НИКВИ, ГКВД г. Алматы, ОКВД Алматинской, Южно-Казахстанской, Акмолинской, Мангыстауской, Костанайской и Павлодарской областей.

Апробация работы. Результаты диссертации доложены на заседании Ученого Совета НИКВИ (2004, 2005, 2006 гг.), на III международной конференции «Первичная и вторичная профилактика социально-значимых заболеваний кожи и ИППП на современном этапе» (2006 г.) г. Алматы.

Публикации. Основные положения диссертации отражены в 9 научных работах, в том числе 3 статей, 6 тезисов.

Связь задач исследования с проблемным планом научно-исследова-тельских работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом Научно-исследовательского кожно-венерологического института Министерства здравоохранения Республики Казахстан в рамках темы НИР 01.02.01 «Разработка новых технологий диагностики, лечения и профилактики ИППП с целью совершенствования первичной и вторичной профилактики ВИЧ-инфекции». Государственный регистрационный номер – 0106РК00419. Шифр – 0.0388.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 144 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, 3 разделов описания результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованных источников, включающего 245 наименований (119 на русском и 126 на английском языках). Работа иллюстрирована 32 таблицами и 36 рисунками и дополнена 1 приложением, изложенным на 12 страницах.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

Материалы и методы исследования. Данная работа выполнена на базе Научно-исследовательского кожно-венерологического института МЗ РК.

Всего было обследовано 80 больных урогенитальным трихомониазом и 18 практически здоровых доноров. Диагноз урогенитального трихомониаза устанавливался на основании клинических и лабораторных данных.

Больные делились на 2 репрезентативные группы наблюдения. В группу контроля вошли 40 человек, пролеченных по известной стандартной схеме метронидазолом с циклофероном по 2,0 мл в/м в прерывистом режиме: в 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23 дни лечения. Среди них мужчин в данной группе было
20 (50,0 %), женщин 20 (50,0 %). В опытной группе было также 40 больных урогенитальным трихомониазом, которые дополнительно к специфической терапии метронидазолом получали рекомбинатный интерлейкин 1β (беталейкин «НИИ особо чистых биопрепаратов» город Санкт-Петербург) (А.С. Симбирцев, 1998). Беталейкин разрешен к клиническому применению (регистрационное удостоверение РК-ЛС-5-№ 008196 от 23.01.2004 г.). Группу составили также 20 мужчин и 20 женщин. Препарат вводился по предложенной авторами схеме в виде подкожных инъекций, из расчета 5 нг/кг массы тела в течение 5 дней.

В качестве критериев безопасности проводился мониторинг параклинических анализов – общий анализ крови, общий анализ мочи, биохимические исследования сыворотки крови (АЛТ, АСТ, общий белок, сахар крови, холестерин) – двукратно, до и после лечения.

Клиническая эффективность лечения трихомониаза определялась по уменьшению или исчезновению основных симптомов воспалительного процесса: уменьшение выделений, зуда, дизурических явлений, болей, нормализации цвета слизистой оболочки, а также других субъективных и объективных данных. Для изучения особенностей иммунологических нарушений у больных урогенитальным трихомониазом проводилось изучение иммунологических параметров иммунофенотипированием лимфоцитов с помощью моноклональных антител (МКА) к дифференцировочным антигенам – CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, CD25+ – до и после лечения.

Выделение лимфоцитов в градиенте фиккол-верографин выполняли по Boyum (1968). Лабораторное подтверждение излеченности урогенитального трихомониаза проводилось иммунологическими (ИФА, выявление АСЛ-ИФА, ЦИК и цитокинов), ПЦР и микроскопическими методами исследования. Группировка, анализ и статистическая обработка проводились на основании рекомендаций (Ю.П. Лисицын, 1987; Е.А. Новиков, 1995) по данным абсолютных чисел и статистических показателей с использованием методов вариационной статистики с вычислением средней арифметической, среднего квадратического отклонения, средней ошибки. Различия считали значимыми при р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Трихомонадная инфекция является причиной воспалительных процессов половых органов у 23–40 % мужчин и у 12–52 % женщин; вызывает бесплодие, способствует возникновению заболеваний у новорожденных (А.Т. Алексанов и соавт., 1996; И.С. Анчупане, 1992; М.М. Васильев, 1990; A.S. Latif et al., 1987; L.S. Mc Laren et. al., 1983). Под трихомонадоносительством следует понимать наличие трихомонад в организме человека при отсутствии клинических признаков заболевания. Число трихомонадоносительства, по данным разных авторов, составляет от 2 % до 41 % и зависит как от штамма трихомонад, так и от особенностей организма хозяина (Е.А. Межеветинова, 1999; М.В. Барышова и соавт., 2001).

Диагностика урогенитального трихомониаза основывается на выявлении клинических признаков заболевания и обнаружения в исследуемом материале T.vaginalis. Методы выявления трихомонадной инфекции неравноценны по диагностической значимости, что вызывает определенные сложности при интерпретации результатов, полученных разными методами. Лабораторная диагностика трихомониаза включает несколько подходов: микроскопия нативного и окрашенного препарата, иммунологические методы, ПЦР-диагностика.

Особое место в диагностике инфекционных заболеваний занимает реакция выявления АСЛ. Как известно, с внедрением в организм возбудителя трихомониаза начинает формироваться иммунный ответ. Возникающая при этом иммунологическая перестройка характеризуется целым каскадом клеточных и гуморальных реакций, направленных против антигенов возбудителя. На ранних этапах развития болезни это проявляется преимущественно специфической клеточной сенсибилизаций (Р.А. Капкаев и соавт., 1998). Поэтому регистрация клеточных специфических реакций по выявлению АСЛ может служить ранним диагностическим тестом в выявлении трихомониаза. Интересно, что введение беталейкина животным после иммунизации животных стимулирует процесс формирования АСЛ. Тест АСЛ кроме ранней диагностики можно использовать для контроля эффективности лечения инфекционных заболеваний, так как АСЛ перестают обнаруживаться существенно быстрее, чем исчезают антитела и быстрее негативации ПЦР (Б.В. Каральник, 2005). В диагностике трихомониаза тест АСЛ не использовался.

Выявление АСЛ с помощью микроскопирования мазков трудоемкий процесс. В одном образце должно быть подсчитано не менее 700 лимфоцитов, на что тратится в среднем 60 мин. В оценке результатов часто играют роль субъективные факторы и технические погрешности. Механическое наслоение лимфоцитов и эритроцитов без взаимодействия клеток дает эффект «розетки» (часто засчитываться как положительный результат), не активный эритроцитарный диагностикум, гемолизированная кровь, неправильно выбранное время экспозиции мазка с ингредиентами, плохо обезжиренное предметное стекло, толстый и неравномерный мазок, плохое освещение – все эти факторы плохо контролируются в ходе постановки реакции. Наслоение ошибок ведет к неправильным выводам. Стандартизировать результаты выявления АСЛ под микроскопом фактически невозможно. Часто с одной и той же пробой получают совершенно разные результаты, и они являются результатом ошибок на конечном этапе постановки реакции – при подсчете «розеток» под микроскопом.

Известно, что к хорошо стандартизированным тестам относится ИФА, так как результат реакции считывается на приборе и выдается в цифрах. Нашей задачей явилось упрощение постановки и повышение точности теста АСЛ. Лучшим способом определения АСЛ может быть не микроскопический метод, а ИФА. В ИФА обычно выявляют антитела, находящиеся в растворе. Мы полагали, что, если специфические рецепторы АСЛ перевести в раствор, то с такой пробой можно проводить ИФА по классической схеме. Для этого предварительно выделенные на фиккол-верографине лимфоциты лизировали предварительно отработанной 1,5 % концентрацией гидроокиси натрия. При этом все специфические рецепторы АСЛ, находящиеся в лимфоцитах или на их поверхности, переходят в раствор. Затем такой лизат подобно сыворотке крови использовали в обычной постановке ИФА с коммерческими тест-системами («Вектор-Бест» г.Новосибирск). Учет результатов проводился по уровню оптической плотности (ОП), точно также как в ИФА. Зависимость между АСЛ определяемой специфичностью и показаниями ОП прямая – чем больше АСЛ, тем больше рецепторов в лизате и тем выше значения ОП в ИФА.

АСЛ-ИФА позволяет исключить «человеческий фактор», который существует при исследовании «розеток» под микроскопом. Постановка реакции значительно проще, требует меньших трудозатрат. Получаемые результаты одинаковы и стабильны. Колебания в результатах составляли всего 0,1 %. Это более объективная реакция, так как ее учет осуществляется с помощью прибора, что в значительной степени исключает «человеческий фактор» ошибок.

Нами проведена оценка эффективности микроскопии мазка, ИФА, ПЦР и разработанной АСЛ-ИФА в диагностике трихомониаза. Всего было обследовано 69 человек. Из них 41 стационарных больных с подозрением на урогенитальный трихомониаз. У всех больных результаты были положительными хотя бы по одной реакции. Обследовались также 18 практически здоровых доноров.

Определено, что наибольшая и фактически одинаковая чувствительность по выявлению трихомониаза у ПЦР (78,0 %) и АСЛ-ИФА (80,4 %). Несколько меньше получено положительных результатов – 30 (73,1 %) при микроскопировании мазков. И существенно меньше по сравнению с ПЦР, АСЛ-ИФА и микроскопированию (р<0,001), в ИФА – всего 15 случаев (36,7 %). Во всех случаях положительный результат в ИФА был также положительным и в АСЛ-ИФА. То есть там, где выявлялись специфические антитела, выявлялись и АСЛ. Но в 18 (43,9 %) результат ИФА оставался отрицательным при положительных значениях АСЛ-ИФА. Среднегеометрический титр в положительных результатах ИФА также оказался значительно ниже (0,616±0,05), чем в АСЛ (1,055±0,08). Активность клеточного иммунитета при трихомониазе существенно более выражена чем гуморального. Хотя и гуморальный и клеточный иммунитет – это звенья одной цепи. С помощью ИФА и определения АСЛ-ИФА выявляется специфическая иммунная реакция макроорганизма на трихомонадную инфекцию и, видимо, часть В-клеток, продуцирующих антитела и регистрируемых в ИФА, обнаруживаются и в реакции определения АСЛ-ИФА. При микроскопировании и в ПЦР регистрируется сам возбудитель трихомониаза. Совпадений положительных результатов в ПЦР и ИФА такое же, как при микроскопии и ИФА – всего 13 (31,7 %). На 2 случая меньше, чем в ИФА и по определению АСЛ-ИФА. Наибольшее количество совпадений отмечено между ПЦР и
АСЛ-ИФА – 26 (63,4 %). Между ПЦР и микроскопией – 25 (60,9 %), столько же между микроскопией и АСЛ-ИФА. Несовпадений больше всего между
АСЛ-ИФА с ПЦР (положительные результаты) и ИФА (отрицательные) –
18 (43,9 %) и 19 (46,3%) соответственно, чуть меньше между микроскопией и ИФА – 17 (41,5 %). При положительной микроскопии на трихомониаз только в 5 случаях (12,1 %) определение АСЛ-ИФА и в 5 (12,1 %) ПЦР оставались негативными. Отрицательные результаты микроскопии с АСЛ-ИФА отмечены в 3 случаях (7,3 %) и с ПЦР – в 4 (9,7 %). Всего 2 совпадения (4,9 %) по отрицательным результатам отмечено в АСЛ-ИФА и ПЦР (таблица 1). У 18 здоровых доноров все 4 реакции были отрицательными.

Таблица 1 – Количество совпадений положительных и отрицательных результатов реакций при обследовании больных на трихомониаз

ИФА

АСЛ-ИФА

ПЦР

положительный

отрицательный

положительный

отрицательный

положительный

отрицательный

абс.

%

абс.

%

абс.

%

абс.

%

абс.

%

абс.

%

АСЛ-ИФА

Положительный

15

36,6

18

43,9

-

-

-

-

26

63,4

7

17,1

Отрицательный

0

-

8

19,5

-

-

-

-

6

14,6

2

4,9

ПЦР

Положительный

13

31,7

19

46,3

26

63,4

6

14,6

-

-

-

-

Отрицательный

2

4,9

7

17

7

17

2

4,9

-

-

-

-

Микро-

скопия

Положительный

13

31,7

17

41,5

25

60,9

5

12,1

25

60,9

5

12,1

Отрицательный

2

4,9

9

21,9

8

19,5

3

7,3

7

17

4

9,7



Скачать документ

Похожие документы:

  1. А. С. Абасова; гоу впо "Дагест гос мед акад. Мз ср рф". Махачкала, 2009. 19с б. ц

    Автореферат
    Абасова, А.С. Динамика содержания оксида азота в желудочном соке у больных кислотозависимыми заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки : Автореф.
  2. Под общей редакцией проф. Малого В. П., проф. Кратенко И. С. Харьков 2008

    Диплом
    Збірник містить праці доповідачів, які відображають етіологію, патогенез, клініку, рівень діагностики і напрямки сучасної терапії та профілактики різноманітних інфекцій.
  3. Під загальною редакцією проф. Малого В. П. проф. Кратенко I. С. Харків 2006

    Диплом
    Збірник містить тези доповідачів, які відображають сучасні погляди на патогенез, клініку та лікування хворих на сепсис. Отримані праці є свідченням наукового напрямку провідних науково-дослідних та лікувальних центрів як в Україні, так і за її межами.

Другие похожие документы..